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β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAG)測(cè)定試劑盒的組成

更新時(shí)間:2023-12-06      瀏覽次數(shù):685

β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAG)測(cè)定試劑盒的組成

比色法 50 /24 樣)

一、測(cè)定原理:

β-N-

β-N-Acetylglucosaminidase,NAG)廣泛存在于各種組

織器官、體液、紅細(xì)胞、白細(xì)胞及血小板中,是溶酶體

中的一種酸性水解酶。底物在 NAG 作用下水解,釋放

出游離的對(duì)硝基酚。加入堿性溶液停止反應(yīng),并使對(duì)硝

基酚顯色。在 400nm 處測(cè)吸光度,可計(jì)算酶活力單位。

二、試劑組成及配制: (試劑 2-8℃保存,有效期 6 個(gè)月)

試劑一:溶液 40mL×1 瓶。

試劑二:底物,粉劑×1 支。

試劑三:終止劑 60mL×2 瓶。

試劑四:液體 6mL×1 瓶。(天冷會(huì)有結(jié)晶析出,測(cè)試前

置于 37℃水浴直至透亮)

試劑五:3mmol/L 對(duì)硝基酚標(biāo)準(zhǔn)貯備液 2mL×1 瓶。

0.6mmol/L 對(duì)硝基酚標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液的配制: 3mmol/L 對(duì)

硝基酚標(biāo)準(zhǔn)貯備液用蒸餾水作 5 倍稀釋,即

3mmol/L 對(duì)硝基酚∶蒸餾水=14 稀釋。

底物緩沖液的配制:底物溶解度小,配制底物溶液時(shí),

應(yīng)先用適量試劑一將試劑二粉劑 1 支調(diào)成糊

狀,再邊攪拌邊逐漸加試劑一到 30mL,混勻

至溶解(不可加熱)。配好后的底物緩沖

液為過飽和溶液,如有結(jié)晶,可靜置或離心后

取上清進(jìn)行檢測(cè)。用不完的底物緩沖液 4℃

保存兩個(gè)月以上。

三、操作步驟:

五、注意點(diǎn):

1、用分光光度計(jì)測(cè)定時(shí)吸光度至 0.60 或酶活力至 60 單位

呈線性,超出此范圍應(yīng)將標(biāo)本用生理鹽水稀釋后重測(cè),

結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。

2、尿酶濃度隨尿流率而變動(dòng),因此尿酶測(cè)定要求留取 24

小時(shí)尿;但因留 24 小時(shí)尿不方便,也不準(zhǔn)確,故用

單位/肌酐"比值計(jì)算酶排出率,效果較好。

附錄Ⅰ: 大鼠腎皮質(zhì)中 NAG 的測(cè)定

1 樣本前處理:

準(zhǔn)確稱取樣本的重量,按照重量(g):體積(mL)=1 : 9

的比例,加入 9 倍體積的生理鹽水,冰水浴條件下機(jī)械勻

漿,制成 10%勻漿,2500 轉(zhuǎn)/分,離心 10 分鐘,取上清

再用生理鹽水稀釋成 1%的勻漿液待測(cè)。(該勻漿濃度僅

為參考用,客戶測(cè)定時(shí)可以根據(jù)這一濃度自行摸索樣本的

實(shí)際所需濃度)

2、 操作步驟:

β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAG)測(cè)定試劑盒的組成



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